Expression, purification, and interaction studies between TRIM25 E3 ubiquitin ligase and Dicer endonuclease

Abstract

Dicer endonukleaasilla ja TRIM25 E3 ligaasilla on merkittävä rooli synnynnäisen immuniteetin antiviraalissa vasteessa. TRIM25 aktivoi RIG-I signalointireittiä, joka johtaa tyypin 1 interferonien tuotantoon. TRIM25 tunnistaa ja sitoutuu substraatteihinsa sen CC- ja PRYSPRY-domeenien avulla. Pienet ei-koodaavat RNA:t, kuten mikroRNAt (miRNAt) ja pienet häiritsevät RNA:t (siRNAt) ovat tärkeitä post-transkriptionallisesti toimivia geenin säätelijöitä. Dicer vaikuttaa miRNA ja siRNA molekyylien tuotantoon pilkkomalla niiden esiasteita lyhyiksi RNA:ksi. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että TRIM25 voi vuorovaikuttaa Dicer helikaasi-domeenin (Hel2i2) kanssa sen PRYSPRY- ja CC-domeenien avulla, mutta vuorovaikutusta ei olla aikaisemmin karakterisoitu. Tässä tutkimuksessa, tuotimme rekombinanttisesti Dicer Hel2i2, TRIM25 PRYSPRY ja TRIM25 CC-PRYSPRY domeenit ja Dicerin ja TRIM25:n välistä vuorovaikutusta tutkittiin rakennebiologisin menetelmin. Onnistuimme luomaan Dicer Hel2i2:lle toimivan ekspressio- ja puhdistusprotokollan ja saimme lisää tietoa sen biokemiallista ominaisuuksista. Tutkimuksemme ei tuottanut tarpeeksi dataa, jotta Dicerin ja TRIM25 välistä vuorovaikutusta olisi saatu kartoitettua.