Näytä suppeat kuvailutiedot

dc.contributor.advisorKivelä, Riikka
dc.contributor.advisorMarjomäki, Varpu
dc.contributor.authorGynther, Veera
dc.date.accessioned2024-12-23T10:48:11Z
dc.date.available2024-12-23T10:48:11Z
dc.date.issued2024
dc.identifier.urihttps://jyx.jyu.fi/handle/123456789/99202
dc.description.abstractRabdomyosarkooma (RMS) on lasten yleisin pehmytkudossyöpä ja muistuttaa histologialtaan erilaistuvaa luustolihasta. RMS-potilaiden ennuste on huono, ja nykyiset hoitomenetelmät aiheuttavat vakavia sivuvaikutuksia. Prospero-related homeobox 1 (PROX1) -transkriptiofaktorin on huomattu olevan yhteydessä RMS-solujen kasvuun, myogeenisiin ominaisuuksiin ja mitokondriogeenien säätelyyn. PROX1-hiljennyksen on huomattu vähentävän RMS-kasvainten kasvua. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, sääteleekö PROX1 RMS-solujen mitkondrioverkostoa ja mitokondriaalista fissiota ja fuusiota. Kokeet tehtiin kahdella RMS-solulinjalla, RD ja KLHEL1, käyttäen kontrollisoluina terveitä primäärisiä myoblasteja. PROX1-hiljennys ja kontrollikäsittely tehtiin hyödyntäen lentivirusvektoria. Mitokondriot visualisoitiin MitoTracker-värjäyksellä ja plasmiditransfektiolla, ja kuvantaminen suoritettiin fiksatuille ja eläville soluille konfokaalimikroskoopilla. Käsitellyt solut segmentoitiin MitoTrackerillä värjättyjen fiksattujen solujen kuvista Cellpose-algoritmin avulla ja niiden mitokondriot analysoitiin ImageJ-kuvankäsittelyohjelmalla. T-testi tai ei-parametrinen Mann-Whitney U -testi suoritettiin GraphPad Prism -tilasto-ohjelmalla mitokondriaalisille muuttujille vertaamalla PROX1-hiljennettyjä ja kontrollisoluja toisiinsa. PROX1-hiljennyksen huomattiin vaikuttavan kaikkiin solutyyppeihin, mutta RD- ja KLHEL1-syöpäsoluihin hiljennys vaikutti enemmän kuin terveisiin primäärisiin myoblasteihin. RD- ja KLHEL1-solujen mitokondriot olivat pienempiä ja pyöreämpiä PROX1-hiljennyksen myötä, mikä viittaa mitokondriaalisen dynamiikan muutoksesta lisääntyneen fission ja vähentyneen fuusion suuntaan. PROX1-hiljennys vähensi mitokondrioita KLHEL1-soluissa, mutta ei vaikuttanut RD-solujen mitokondrioiden määrään. Terveiden primääristen myoblastien mitokondrioita oli vähemmän, mutta niiden koko tai muoto ei muuttunut PROX1-hiljennyksen myötä. Näitä tuloksia voidaan toivottavasti hyödyntää uusien hoitomenetelmien kehittelyssä, mahdollisesti mitokondriaalista fissiota tehostamalla tai fuusiota inhiboimalla lääkkeiden avulla.fi
dc.description.abstractRhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children, and its histology resembles developing skeletal muscle. The prognosis for RMS patients is poor, and current treatment methods cause severe side effects. Prospero-related homeobox 1 (PROX1) transcription factor has been linked to growth, myogenic properties and mitochondrial gene regulation of RMS cells. PROX1 silencing has been noticed to reduce RMS tumor growth. This study aimed to determine if PROX1 regulates the mitochondrial network and mitochondrial fission and fusion in RMS cells. The experiments were conducted with two RMS cell lines, RD and KLHEL1, using healthy primary myoblasts as control cells. PROX1 silencing and control treatment were done utilising a lentiviral vector. Mitochondria were visualised with MitoTracker staining and plasmid transfection, and imaging was conducted for fixed and live cells using confocal microscopy. The treated cells were segmented from the MitoTracker stained fixed cell images with Cellpose and their mitochondria were analysed in ImageJ with a custom-made macro. A t-test or a non-parametric Mann-Whitney U test was conducted in GraphPad Prism for mitochondrial variables comparing PROX1 silenced and control cells. PROX1 silencing was noticed to affect the mitochondrial network of all cell types, but RD and KLHEL1 RMS cells were more affected than the healthy primary myoblasts. The mitochondria of RD and KLHEL1 cells were smaller and rounder due to PROX1 silencing, which indicates that mitochondrial dynamics shift towards increased mitochondrial fission and decreased mitochondrial fusion. PROX1 silencing did not affect mitochondria count in RD cells but reduced mitochondria count in KLHEL1 cells. Healthy primary myoblasts had fewer mitochondria, but their size and shape remained unchanged due to PROX1 silencing. These results can hopefully be utilised in the development of novel treatment methods for RMS, possibly through drugs enhancing mitochondrial fission or inhibiting mitochondrial fusion.en
dc.format.extent57
dc.language.isoen
dc.subject.otheralveolar rhabdomyosarcoma
dc.subject.otherembryonal rhabdomyosarcoma
dc.subject.otherfusion gene
dc.subject.othermesenchymal stem cell
dc.subject.othermitochondrial fission
dc.subject.othermitochondrial fusion
dc.subject.othermitochondrial network
dc.subject.othermyofiber
dc.subject.othermyofiber
dc.subject.otheroxidative phosphorylation
dc.subject.otherprospero-related homeobox 1
dc.subject.otherPROX1
dc.subject.otherregulation
dc.subject.otherrhabdomyosarcoma
dc.subject.otherRMS
dc.subject.othersatellite cell
dc.subject.otherskeletal muscle
dc.subject.othersoft tissue sarcoma
dc.titleThe regulation of mitochondrial network in rhabdomyosarcoma by prospero-related homeobox 1
dc.typemaster thesis
dc.identifier.urnURN:NBN:fi:jyu-202412238005
dc.type.ontasotMaster’s thesisen
dc.type.ontasotPro gradu -tutkielmafi
dc.contributor.tiedekuntaMatemaattis-luonnontieteellinen tiedekuntafi
dc.contributor.tiedekuntaFaculty of Sciencesen
dc.contributor.laitosBio- ja ympäristötieteiden laitosfi
dc.contributor.laitosDepartment of Biological and Environmental Scienceen
dc.contributor.yliopistoJyväskylän yliopistofi
dc.contributor.yliopistoUniversity of Jyväskyläen
dc.contributor.oppiaineSolu- ja molekyylibiologiafi
dc.contributor.oppiaineCell and molecular biologyen
dc.rights.copyrightJulkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.fi
dc.rights.copyrightThis publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.en
dc.contributor.oppiainekoodi4013
dc.subject.ysomitokondriot
dc.subject.ysosolubiologia
dc.subject.ysosolut
dc.subject.ysomitokondrio-DNA
dc.subject.ysokantasolut
dc.subject.ysovisualisointi
dc.subject.ysogeenit
dc.subject.ysosoluviljely
dc.subject.ysomitochondria
dc.subject.ysocell biology
dc.subject.ysocells
dc.subject.ysomitochondrial DNA
dc.subject.ysostem cells
dc.subject.ysovisualisation
dc.subject.ysogenes
dc.subject.ysocell culture
dc.rights.accessrightsTekijä ei ole antanut lupaa avoimeen julkaisuun, joten aineisto on luettavissa vain Jyväskylän yliopiston kirjaston arkistotyösemalta. Ks. https://kirjasto.jyu.fi/kokoelmat/arkistotyoasema..fi
dc.rights.accessrightsThe author has not given permission to make the work publicly available electronically. Therefore the material can be read only at the archival workstation at Jyväskylä University Library (https://kirjasto.jyu.fi/collections/archival-workstation).en


Aineistoon kuuluvat tiedostot

Thumbnail

Aineisto kuuluu seuraaviin kokoelmiin

Näytä suppeat kuvailutiedot