Sperm flagellar protein 2 expression in mouse tissues and transfection in mIMCD3 cells
Tekijät
Päivämäärä
2020Tekijänoikeudet
Julkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.
Miesten hedelmättömyys on kasvava ongelma länsimaissa. Värekarvasairaudet voivat aiheuttaa miesten hedelmättömyyttä. Siittiöiden kehityksen tutkimus voi valaista syitä siittiöiden rakenteellisten ja toiminnallisten vikojen taustalla. Sperm flagellar protein 2 (Spef2) -geeni ilmentyy kudoksissa, joissa on liikkuvia värekarvoja, ja se on välttämätön siittiön hännän kehitykselle ja liikkuvuudelle. Spef2-knockout hiirimallin avulla tutkittiin Spef2:n toimintaa värekarvoissa ja siittiöissä. Liikkuvien värekarvojen toimintahäiriöt aiheuttavat hiirimallilla kroonisia hengitystieinfektioita, siittiövioista johtuvaa hedelmättömyyttä ja vesipäätä. Tämän tutkimuksen tavoite oli kehittää vasta-aine, joka sitoutuu SPEF2:n adenylaattikinaasidomeeniin (KAD). Antigeeni vasta-ainetta varten tuotettiin E.colissa ja puhdistettiin affiniteettikromatografialla. Western blot-menetelmällä ekspressio havaittiin kiveksessä, lisäkiveksessä, keuhkoissa, munanjohtimessa ja mahdollinen uusi isoformi aivoissa. Kaksi SPEF2-isoformia puuttui poistogeenisten hiirten kiveksistä. Kudosvärjäyksissä SPEF2 lokalisoitui spermatosyytteihin, spermatideihin, spermatidien mansettiin, siittiön häntään, Sertolin soluihin ja henkitorven epiteelisolujen värekarvoihin. Toinen tavoite oli kehittää fluoresoiva solulinja, jolla tutkitaan SPEF2:n kuljetusta värekarvaan. Kolme SPEF2-GFP fuusioproteiinia ilmennettiin eri mIMCD3-solulinjoissa. 5´TE-GFP, KAD-GFP ja 3´TE-GFP vastasivat kivesspesifisen Spef2-sekvenssin eri toiminnallisia alueita. Fuusioproteiinien paikantuminen värekarvaan tai siihen liittyviin rakenteisiin, kuten basal bodyyn, viittaa että Spef2:lla olisi useita värekarvalokalisaatiosignaaleja.
...
Male infertility is an increasing problem in Western countries. Male infertility is associated with ciliary dyskinesias, which are diseases of motile cilia. Research on sperm cell development can elucidate causes behind sperm structural and functional defects. Sperm flagellar protein 2 (Spef2) gene is expressed in ciliated tissues, and the mutations in Spef2 cause male infertility. Spef2 mutant mice have defective cilia in respiratory tract, males are infertile, and the mice develope postnatally a severe hydrocephalus causing lethality. First aim of this study was to develop a novel antibody against adenylate kinase domain (KAD) of SPEF2 protein. Antigen was produced in E. Coli and purified by affinity chromatography. In Western blot, SPEF2 isoforms were detected in wild-type testis, epididymis, lung and oviduct, and a possible novel isoform was observed in brain. Two SPEF2 isoforms were absent in knockout testis. In tissue staining, SPEF2 localized to late spermatocytes, round spermatids, manchette of elongating spermatids, sperm tail midpiece, Sertoli cells, and tracheal epithelial cilia. Second aim of the study was to create a fluorescent cell line to investigate transport of SPEF2 to the cilium and ciliary localization signals. Three SPEF2-GFP fusion proteins were expressed in separate mIMCD3 cell lines: 5’TE-GFP, KAD-GFP, and 3’TE-GFP, which represent different domains of testis-specific Spef2 sequence. Each fusion protein was localized to the cilium or cilium-associated structures such as basal body, which indicates that Spef2 contains multiple ciliary localization signals.
...
Asiasanat
Metadata
Näytä kaikki kuvailutiedotKokoelmat
- Pro gradu -tutkielmat [28992]
Samankaltainen aineisto
Näytetään aineistoja, joilla on samankaltainen nimeke tai asiasanat.
-
Pathogenesis and autoimmunity initiated by a viral protein-induced apoptotic bodies
Pirttinen, Heidi (2016)Ihmisen parvovirus B19 (B19) on laajalle levinnyt, yleinen virus, joka aiheuttaa lapsissa parvorokkoa (viides tauti). Aikuisille B19 aiheuttaa erinäisiä sairauksia, muun muassa nivelkipuja ja – tulehdusta, anemiaa, sekä ... -
A little bit of help from the mother goes a long way : the effect of maternal antibodies on antibody levels and growth during the first year of the magpie (Pica pica)
Rauhala, Katja (2020)Emolta munan kautta siirtyvät vasta-aineet antavat tärkeän lyhytkestoisen immuniteettisuojan linnunpoikasen ensimmäisten elinviikkojen aikana, kun sen oma spesifisempi immuunipuolustus on vielä kehityksen alla. Emon ... -
EGFR gene copy number decreases during anti-EGFR antibody therapy in colorectal cancer
Birkman, Eva-Maria; Avoranta, Tuulia; Ålgars, Annika; Korkeila, Eija; Lintunen, Minnamaija; Lahtinen, Laura; Kuopio, Teijo; Ristamäki, Raija; Carpén, Olli; Sundström, Jari (Elsevier Inc., 2018)Epidermal growth factor receptor (EGFR) gene copy number (GCN) increase is associated with a favorable anti-EGFR antibody treatment response in RAS wild-type metastatic colorectal cancer. However, there are limited and ... -
Serological Follow-Up Study Indicates High Seasonal Coronavirus Infection and Reinfection Rates in Early Childhood
Kolehmainen, Pekka; Heroum, Jemna; Jalkanen, Pinja; Huttunen, Moona; Toivonen, Laura; Marjomäki, Varpu; Waris, Matti; Smura, Teemu; Kakkola, Laura; Tauriainen, Sisko; Peltola, Ville; Julkunen, Ilkka (American Society for Microbiology, 2022)Seasonal human coronaviruses (HCoVs) cause respiratory infections, especially in children. Currently, the knowledge on early childhood seasonal coronavirus infections and the duration of antibody levels following the first ...
Ellei toisin mainittu, julkisesti saatavilla olevia JYX-metatietoja (poislukien tiivistelmät) saa vapaasti uudelleenkäyttää CC0-lisenssillä.