Show simple item record

dc.contributor.advisorOllila, Saara
dc.contributor.advisorYlänne, Jari
dc.contributor.authorLemmetyinen, Toni
dc.date.accessioned2020-05-11T06:10:50Z
dc.date.available2020-05-11T06:10:50Z
dc.date.issued2020
dc.identifier.urihttps://jyx.jyu.fi/handle/123456789/68909
dc.description.abstractEnteroendokriinisolu (EE-solu) on yksi suoliston normaalia toimintaa ylläpitävä solutyyppi, jonka on todettu välittävän hermostosta tulevia viestejä. Aikaisemmassa tutkimuksessa EE-solujen on todettu muuntuvan takaisin kantasoluiksi ja edesauttaneen suoliston uusiutumista, mikäli alkuperäiset kantasolut ovat tuhoutuneet. Näiden EE-solujen on havaittu ilmentävän RET reseptoria. RET on tyrosiinikinaasireseptori neurotrofisille kasvutekijöille, joita eritetään alueella, jossa kantasoluja sijaitsee. On mahdollista, että neurotrofiset kasvutekijät vaikuttavat suoliston kantasoluihin ja niistä polveutuvien EE-solujen tasapainon säätelyyn RET reseptorin kautta. Täten RET signaloinnilla voi olla vaikutusta suoliston uusiutumiseen ja sen kehittymiseen. Tässä tutkimuksessa haluttiin todentaa RET-solujen esiintyminen suoliston epiteelissä ja selvittää, pystyvätkö RET-solut toimimaan kantasoluina organoidikasvatuksessa. Lisäksi haluttiin tutkia, onko neurotrofisilla kasvutekijöillä vaikutusta RET-solujen erilaistumiseen tai kykyyn toimia kantasoluina. Tutkimuksessa käytettiin hiirimallia, jossa Ret geeniin oli liitetty fluoresoiva merkkigeeni. Tämän avulla RET-soluja pystyttiin leimaamaan yhdessä EE-soluille tyypillisten proteiinien kanssa sekä eristämään yksittäisiä soluja virtaussytometrialla. Yksittäisiä RET-soluja eristettiin organoidikasvatukseen sekä mitattiin geenien ilmentymistä kvantitatiivisen polymeraasiketjureaktion avulla. RET reseptoria ilmentäviä soluja löytyi sekä suolikuopakkeesta että nukkalisäkkeestä ja solut ilmensivät EE-soluille tyypillisiä proteiineja. Tutkimus ei pystynyt selvittämään neurotrofisten kasvutekijöiden vaikutusta yksittäisille RET-soluille, sillä RET-solujen kyky toimia kantasoluina ja muodostaa organoideja sai ristiriitaisia tuloksia. Suolikuopakkeista kasvatetuissa organoideissa neurotrofiset kasvutekijät kasvattivat EE-solujen määrää ja mRNA tasoja. Tässä tutkimuksessa pystyttiin todentamaan RET-solut suoliston epiteelissä EE-soluiksi ja havaittiin neurotrofisilla kasvutekijöillä olevan vaikutusta EE-solujen erikoistumiseen organoidikasvatuksessa. Yksittäisten RET-solujen kyky toimia kantasoluina ja neurotrofisten kasvutekijöiden vaikutus suoliston kantasolujen säätelyyn vaatii vielä lisätutkimusta.fi
dc.description.abstractOne of the cell types in small intestine epithelium are hormone secreting enteroendocrine cells (EECs), which are known to interact with neuronal signals. Previously, a subset of EECs has been shown to act as reserve stem cells when homeostatic stem cells are destroyed. We found that these specific EECs express mRNA of the tyrosine kinase receptor RET. RET is the receptor for neurotrophic factors, which are secreted by fibroblasts adjacent to intestinal stem cells. We hypothesize that the stemness-differentiation balance of the EECs is regulated by neurotrophic factors via RET receptor and thus RET signaling has a role in regeneration and maturation of the intestinal epithelium. The aim of this study was to characterize RET-expressing cells in the intestinal epithelium and to test whether single RET-expressing cells act as stem cells by growing them ex vivo in organoid culture. In addition, we wanted to address whether neurotrophic factors affect the stemness or differentiation of RET+ cells. To address these aims, a specific mouse model was used where a fluorescent marker gene was inserted into a Ret gene locus enabling the co-staining of RET-expressing cells with EEC markers and isolation of single cells with fluorescence activated cell sorter followed by gene expression analysis by quantitative PCR. RET-expressing cells were found in crypts and villi and they expressed EEC markers. Isolated RET+ cells could act as stem cells in organoid culture, but the result was not repetitive giving inconclusive results. The effect of neurotrophic factors on single RET+ cells could not be achieved, however, neurotrophic factors increased the expression levels of EEC markers and the amount of EEC cells in ex vivo crypt culture. In conclusion, RET is expressed in EECs and neurotrophic factors increase EEC marker expression suggesting a role in EEC differentiation. The study could not conclude whether RET+ cells can act as reserved stem cells or whether neurotrophic factors regulate intestinal epithelium stem cells.en
dc.format.extent48
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.language.isoen
dc.subject.otherenteroendocrine cells
dc.subject.otherglial cell line-derived neurotrophic factor
dc.subject.otherorganoid
dc.subject.othertyrosine kinase
dc.titleCharacterization of RET-expressing cells in the intestinal crypt
dc.identifier.urnURN:NBN:fi:jyu-202005113115
dc.type.ontasotPro gradu -tutkielmafi
dc.type.ontasotMaster’s thesisen
dc.contributor.tiedekuntaMatemaattis-luonnontieteellinen tiedekuntafi
dc.contributor.tiedekuntaFaculty of Sciencesen
dc.contributor.laitosBio- ja ympäristötieteiden laitosfi
dc.contributor.laitosDepartment of Biological and Environmental Scienceen
dc.contributor.yliopistoJyväskylän yliopistofi
dc.contributor.yliopistoUniversity of Jyväskyläen
dc.contributor.oppiaineSolu- ja molekyylibiologiafi
dc.contributor.oppiaineCell and molecular biologyen
dc.rights.copyrightJulkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.fi
dc.rights.copyrightThis publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.en
dc.type.publicationmasterThesis
dc.contributor.oppiainekoodi4013
dc.subject.ysokantasolut
dc.subject.ysoohutsuoli
dc.subject.ysostem cells
dc.subject.ysosmall intestine
dc.format.contentfulltext
dc.rights.accessrightsTekijä ei ole antanut lupaa avoimeen julkaisuun, joten aineisto on luettavissa vain Jyväskylän yliopiston kirjaston arkistotyösemalta. Ks. https://kirjasto.jyu.fi/fi/tyoskentelytilat/laitteet-ja-tilat..fi
dc.rights.accessrightsThe author has not given permission to make the work publicly available electronically. Therefore the material can be read only at the archival workstation at Jyväskylä University Library (https://kirjasto.jyu.fi/en/workspaces/facilities).en
dc.type.okmG2


Files in this item

Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record