Tetracycline resistance genes in aquaculture with a focus on inactivation enzyme-coding tet(X)

Abstract

Bakteereilla esiintyvä antibioottivastustuskyky on ollut maailmanlaajuisessa kasvussa sekä puheenaiheena että terveydenhuollon ongelmana. Yksi vastustuskyvyn lähteistä löytyy kalankasvatuksesta. Kalojen tauteja hoidetaan ihmisten lääkitsemiseen käytettävillä antibiooteilla, jotka luovat valintapainetta vesistön bakteereihin. Kalankasvatuksessa yleisesti käytettäviin antibiootteihin kuuluvat tetrasykliinit, lääkeryhmä, joka rampauttaa mikrobin proteiinisynteesijärjestelmän. Uuden sukupolven tetrasykliineihin kuuluva tigesykliini on yksi viimeisen linjan antibiooteista, joita käytetään bakteeri-infektion hoitoon silloin, kun mikään muu lääke ei toimi. Tutkimuksessa mitattiin Keski-Suomessa sijaitsevien kalankasvatuslaitosten sisään- ja ulostulovesistä vastustuskykyisten bakteerien, sekä kolmen resistenssigeenin, tet(A):n, tet(C):n ja tet(X):n määriä. Mainituista geeneistä tet(X) koodaa entsyymiä, joka kykenee inaktivoimaan suurinta osaa tetrasykliineistä, mukaan lukien tigesykliiniä. Tämän vuoksi suoritettiin myös kasvatuskokeita, joissa tarkasteltiin, miten tet(X):n sisältävän bakteeri-isolaatin, SK7:n, läsnäolo vaikutti tetrasykliiniherkän Escherichia coli -kannan DH5α kasvuun tetrasykliinimaljoilla. Tulosten perusteella voitiin todeta, että sekä vastustuskykyisten bakteerien että resistenssigeenien määrä oli selvästi suurempi poistovedessä sisääntuloveteen verrattuna. Lisäksi tet(X)-geeniä käyttävän SK7:n läsnäolo salli DH5α:n kasvun tetrasykliinimaljoilla. Näin ollen on mahdollista, että tiukasta antibioottien käyttöä koskevasta lainsäädännöstä huolimatta antibioottiresistenssi voi kehittyä luonnonpopulaatioissa kalankasvatuksen seurauksena.

One of the sources for antibiotic resistance, a major problems facing global healthcare, can be found in aquaculture. Fish farms use the same antibiotics as we do in hospitals or get from the pharmacy. These include tetracyclines, a group of antibiotics that inactivate the translational system of the bacterial cell. Almost all tetracycline resistance genes code for efflux pumps or protective proteins, but one gene, tet(X), codes for a degradative enzyme that has been shown to be able to inactivate most tetracyclines irreversibly, including the last-line drug tigecycline. In this study we collected water samples from fish farms in Central Finland and measured the overall amounts of tetracycline resistant bacteria using plating methods and the number of the resistance genes tet(A), tet(C) and tet(X) by reaction qPCR analysis in the farm’s inlet and outlet waters. We also isolated one bacterial strain harboring the tet(X) gene and monitored the effect of its presence to the growth of the susceptible Escherichia coli strain DH5α in the presence of tetracycline. We were able to show that fish farming increases tetracycline resistance, with tet(C) being the most abundant in the outlet water. The amount of tetracycline-inactivating gene tet(X) increased also considerably, and the tet(X)-harboring bacterial isolate SK7 enabled the growth of tetracycline-susceptible DH5α on plates containing the antibiotic. So, even with the highly regulated antibiotic usage in EU, antibiotics used in aquaculture may cause changes in the resistance gene profile in the environment.