Luun morfogeneettisen proteiini 4:n kohdegeenien SKIL ja ID2 vaikutukset rintasyöpäsoluihin

Abstract

Rintasyöpä on johtava naisten syöpäkuolemien aiheuttaja maailmanlaajuisesti. Luun morfogeneettiset proteiinit (BMP) ovat tranformoiva kasvutekijä beta- superperheeseen kuuluvia proteiineja. BMP:den tiedetään olevan osallisina monissa syöpätyypeissä. Rintasyövässä BMP4:llä on merkittäviä vaikutuksia solukasvuun, liikkuvuuteen ja levinnäisyyteen. Aiempien tutkimusten mukaan BMP4:n on havaittu laskevan solukasvua merkittävästi rintasyöpäsoluilla. Tämän tutkimuksen kohteena oli kaksi BMP4:n kohdegeeniä, ID2 (Inhibitor of DNA binding 2) ja SKIL eli SKI-like proto-onkogeeni. Hypoteesina oli selvittää johtuuko BMP4:n vaikutukset solukasvuun ID2- tai SKIL-geenistä. BT-474 ja T-47D rintasyöpäsoluja käsiteltiin ihmisen rekombinantti proteiini BMP4:lla tai pelkällä kuljettimella ( BMP4:n liuoitusneste). ID2 ja SKIL hiljennettiin RNA häirinnän avulla käyttäen geeneihin kohdennettuja siRNAa: siSKIL, siID2 ja kontrollina lusiferaasigeenin hiljentävä siLUC. Hiljentämisen vaikutuksia solukasvuun määritettiin solulaskuin kahdessa aikapisteessä. Geenien hiljentyminen varmistettiin RT-qPCR:llä. BMP4 laski solukasvua BT-474 ja T-47D soluilla merkittävästi. BMP4:n vaikutukset olivat yhteneväiset ryhmän aiempien tutkimusten kanssa. Solulaskujen perusteella geenien hiljentämisellä ei ollut vaikutusta solukasvuun. Tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää ovatko kyseiset geenit osallisena BMP4:n aiheuttamaan solukasvun alenemiseen. Tulokset osoittivat etteivät ID2 tai SKIL ainakaan yksistään ole vastuussa BMP4:n vaikutuksista solukasvuun.

Breast cancer is the leading cause of cancer deaths among women worldwide. Bone morphogenetic proteins (BMPs) are a protein family that belongs to transforming growth factor β superfamily. BMPs are involved in many cancer types. In the case of breast cancer BMP4 has a significant influence on cell growth, migration, and invasion. Previous studies have shown that BMP4 decreased cell growth of breast cancer cells significantly. The aim of this study was to examine two BMP4 target genes, Inhibitor of DNA binding 2 (ID2) and SKI-like proto-oncogene (SKIL). The hypothesis was that ID2 and SKIL were involved in the effects of BMP4 on cell growth. Breast cancer cells BT-474 and T-47D were treated with human recombinant BMP4 or vehicle (0,1 % BSA in 4 mM HCl). ID2 and SKIL were silenced by RNA interference using the targeted siRNAs; siSKIL, siID2 and a control was siLUC (luciferase gene). Effects of silencing on cell growth were followed by cell counting in two time points. Gene silencing was confirmed by qPCR. BMP4 decreased the growth of BT-474 and T-47D cells significantly. Effects of BMP4 were consistent with previous studies. Results of cell counting showed that the silencing of the genes did not affect cell growth. In conclusion, the aim was to observe whether the BMP4 target genes were involved in the BMP4 -induced decrease of cell growth in breast cancer cells. The results showed BMP4 decreased cell growth but they also showed that ID2 or SKIL alone does not to affect cell growth.