Show simple item record

dc.contributor.advisorPawlowski Alice
dc.contributor.advisorBamford jaana
dc.contributor.authorMoilanen, Anni
dc.date.accessioned2016-02-10T06:42:12Z
dc.date.available2016-02-10T06:42:12Z
dc.date.issued2015
dc.identifier.otheroai:jykdok.linneanet.fi:1522096
dc.identifier.urihttps://jyx.jyu.fi/handle/123456789/48714
dc.description.abstractVP11 on termofiilisen bakteriofagin P23-77 kapsidiproteiini ja se muodostaa ikosahedraalisen kapsidirakenteen yhdessä pääkapsidiproteiinien, virusproteiini (VP)16 ja VP17, kanssa. VP11 tarkkaa paikkaa ja toimintaa kapsidissa ei tiedetä. Aiemmissa tutkimuksissa VP11 on arveltu sijaitsevan joko kapsidikuoren alapuolella tai kapsidin ulkopinnalla piikkirakenteissa. Tutkimuksen tavoitteena oli optimoida VP11 havaitsemisessa käytettävä western blot –menetelmä, arvioida VP11 määrää kapsidissa ja tutkia VP11 sijaintia vasta-ainevärjäyksen ja transmissio elektronimikroskopian (TEM) avulla. Western blot –menetelmän optimoinnissa käytettiin puoli kuivaa (engl. semi-dry) menetelmää vaihtelemalla vasta-ainevärjäysolosuhteita. VP11 määrää kapsidissa analysoitiin denaturoivan polyakryyliamidigeelin juovien intensiteetteihin avulla. P23-77 kasvatettiin isäntäbakteeri Thermus thermophiluksessa, jota seurasi kaksivaiheinen viruspuhdistus. Puhdistettu virus vasta-aineleimattiin ja kuvattiin TEMilla. Western blot –menetelmän optimointi onnistui, menetelmä antoi tarkan signaalin optimaalisten vasta-ainevärjäysolosuhteiden löydyttyä. Lisäksi western blot –tulokset viittasivat siihen että VP11 on rakenteeltaan dimeeri. VP11 kopiomäärän arvioitiin olevan 147, joka viittaa siihen että VP11 ei ole osallisena viruksen kapsidin piikkirakenteissa. Alustavat TEM kokeet tukevat sitä että VP11 ei sijaitse kapsidin ulkopinnalla. Saatujen tulosten perusteella VP11 sijaitsee viruskapsidin sisäpuolella dimeeri-rakenteena. Proteiinin sijainnin ja muiden ominaisuuksien vuoksi VP11 saattaa olla hyödyllinen tulevaisuuden bioalan sovelluksissa.fi
dc.description.abstractVP11 is a minor capsid protein of the thermophilic bacteriophage P23-77 and comprises the icosahedral capsid mainly with two major capsid proteins (MCPs) virion protein (VP) 16 and VP17. The exact localization and function of VP11 is unknown. Yet, previous studies suggests that VP11 is located either between the protein capsid and the internal lipid membrane or occupies the capsid vertices on the outer side of the capsid. The aims of the study were to optimize a western blot method for the detection of VP11, estimate the copy number of VP11 in the virus particle and study the localization of VP11 by using immunolabelling and transmission electron microscopy (TEM). Western blots were performed with purified virus samples in a semi-dry transfer system with varying immunolabelling conditions. The copy number of VP11 was analyzed based on band intensities in denaturing polyacrylamide gels. P23-77 was cultured by using Thermus thermophilus as a host and purified by rate zonal and equilibrium centrifugation. Purified virus particles were immunolabelled for TEM. The optimization of the western blot method succeeded, specific signals were received after suitable immunolabelling conditions were found. In addition, the western blot results imply that VP11 exists as a dimer in the P23-77 virion. The copy number of VP11 was estimated to be approximately 147 copies. Both findings indicate that VP11 is not the penton protein occupying the capsid vertices. Supporting this theory, preliminary studies with TEM suggest that VP11 does not exist on the outer side of the capsid. Rather, VP11 is located underneath the protein shell as a dimer. Due to its proposed location and other qualities, VP11 might have potential in future biochemical applications.en
dc.format.extent1 verkkoaineisto (39 sivua)
dc.language.isoeng
dc.rightsJulkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.fi
dc.rightsThis publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.en
dc.titleImmunodetection of VP11, the minor capsid protein of thermophilic bacteriophage P23-77
dc.identifier.urnURN:NBN:fi:jyu-201602101524
dc.type.ontasotPro gradufi
dc.type.ontasotMaster's thesisen
dc.contributor.tiedekuntaMatemaattis-luonnontieteellinen tiedekuntafi
dc.contributor.tiedekuntaFaculty of Sciencesen
dc.contributor.laitosBio- ja ympäristötieteiden laitosfi
dc.contributor.laitosDepartment of Biological and Environmental Scienceen
dc.contributor.yliopistoUniversity of Jyväskyläen
dc.contributor.yliopistoJyväskylän yliopistofi
dc.contributor.oppiaineSolu- ja molekyylibiologiafi
dc.contributor.oppiaineCell and molecular biologyen
dc.date.updated2016-02-10T06:42:13Z
dc.rights.accesslevelopenAccessfi
dc.contributor.oppiainekoodi4013
dc.subject.ysovirukset
dc.subject.ysokapsidi
dc.subject.ysobakteriofagit


Files in this item

Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record