Cloning of a cDNA for human agrin and generation of antisera against recombinant human agrin

Abstract

Agriini on heparaanisulfaatti proteoglykaani, jota esiintyy laajalti ihmisen elimistön eri kudoksissa. Vaikka agriini tunnetaankin parhaiten hermo-lihasliitoksen syntymekanismista, sillä on myös keskeinen rooli hermolihasliitoksen surkastumasairauksissa sekä Alzheimerin taudissa. Huolimatta mahdollisista hyödyistä, joita agriinin laajemmalla kudostutkimuksella voitaisiin saavuttaa, ihmisen agriinin vasta-aineita ei ole kaupallisesti saatavilla. Jotta agriinin ilmentymistä voitaisiin paremmin tutkia, tämän työn tarkoituksena oli antiseerumien kehittäminen rekombinantti-agriinista. Tämä tehtiin agriini-proteiinia koodaavan jakson kloonauksella ihmisalkion cDNA-kirjastosta, tuottamalla rekombinanttiproteiinia bakteerisoluissa ja puhdistamalla kyseinen proteiini metalli-ioni-affiniteettikromatografialla. Tämän jälkeen vasta-aineita tuotettiin kaupallisesti immunisoimalla kaneja ja marsuja agriini-proteiinilla. Lopuksi vasta-aineet eristettiin eläinten seerumeista. Tuotetut vasta-aineet reagoivat Western-blottauksessa ja solujen värjäyksessä, mutta kudosten histologinen värjäystekniikkaa vaatii edelleen lisätutkimusta.