FACS-based Phenotype Analysis of White Blood Cells : Interplay with Lynch Syndrome Related Circulating Micro-RNAs

DNA:n korjausgeenien mutaatiosta aiheutuva Lynchin syndrooma (LS) on perinnöllinen syöpien kehittymiselle altistava sairaus. LS kantajien syöpäriskiin vaikuttavia tekijöitä ei vielä ole kunnolla tutkittu. Epigeneettisten tekijöiden, kuten ei-koodaavien verenkierron mikro-RNA:den (cmiR), jotka säätelevät geenien ilmenemistä, on kuitenkin todettu vaikuttavan syöpäriskiin. Tutkimuksissa on havaittu tiettyjen cmiR:iden ilmenemistasojen poikkeavan LS:n kantajilla verrattuna terveisiin ei-kantajiin. LS kantajien cmiR tasot olivat hyvin samankaltaiset kolorektaalisyöpäpotilailta tutkittujen cmiR tasojen kanssa, mikä viittaa siihen, että löydetyt miR:t voisivat vaikuttaa syövän kehittymiseen tai torjuntaan. Koska valkosolut toimivat syövän torjunnassa, on mahdollista, että nämä LS:ssa poikkeavissa määrin ilmenevät verenkierron miR:t (LS cmiR:t) vaikuttaisivatkin syöpäriskiin valkosolujen kautta. Tämän työn tarkoituksena oli kehittää menetelmä cmiR:iden ilmentymismäärien tutkimiseen erityyppisissä valkosoluissa, ja siten tarkastella ilmentävätkö valkosolut myös LS cmiR:ita. Tätä varten terveiltä ihmisiltä otetuista verinäytteistä eristettiin valkosolut ja ne lajiteltiin tyypeittäin erillisiksi solupopulaatioiksi virtaussytometrilla. Solujen miR:t eristettiin ja qPCR:n avulla tutkittiin sisälsivätkö näytteet seuraavia LS cmiR:ita: miR-339-5p, let-7e-5p, miR-451a, miR-320a ja miR-15a-5p. Tulokset osoittivat, että valkosolut ilmensivät kaikkia edellä mainituista cmiR:ista. miR-320a tasot olivat lisäksi huomattavia eri valkosolutyypeissä, erityisesti neutrofiileissä. Tämä voisi viitata siihen, että miR-320a säätelisi neutrofiilien toimintaa. Lisäksi työssä tutkittiin vaikuttaako miR-15a-5p syövän kehitykseen yhdistetyn ja tulehdusta aiheuttavan viestiaineen, interleukiini-1β:n (IL-1β) säätelyyn. miR-15a-5p:tä siirrettiin viljeltyihin ihmisen valkosoluihin, IL-1β:n tuotto käynnistettiin lisäämällä viljelmiin lipopolysakkaridia ja IL-1β:n geenien ilmentymistasoja valkosoluissa tutkittiin qPCR:lla. Selkeää muutosta IL-1β:n ilmenemisessä miR-15a-5p sisältävissä soluissa verrattuna kyseistä cmiR:ta sisältämättömiin soluihin ei kuitenkaan havaittu. Tutkimus osoitti kehitettyjen menetelmien kuitenkin olevan toimivia samankaltaisiin tutkimustarkoituksiin osoittaen valksolujen ja LS cmiR:iden välisen yhteyden ja sen tarkemman tutkimisen tärkeyden tulevaisuudessa.