Näytä suppeat kuvailutiedot

dc.contributor.advisorTurkki, Vesa
dc.contributor.advisorSundberg, Lotta-Riina
dc.contributor.authorKekkonen, Nanne
dc.date.accessioned2020-03-10T09:48:30Z
dc.date.available2020-03-10T09:48:30Z
dc.date.issued2020
dc.identifier.urihttps://jyx.jyu.fi/handle/123456789/68113
dc.description.abstractGeeniterapiassa sairautta hoidetaan geenin siirrolla, usein viemällä siirtogeeni soluun kuljettimen eli vektorin avulla. Yleisimpiä käytettyjä vektoreita ovat virukset johtuen niiden luontaisesta kyvystä siirtää perimänsä solujen monistettavaksi. Virusvektoreiden valmistuksessa lopputuotteen ominaisuuksiin voidaan vaikuttaa genomin muokkaamisella, mutta myös esimerkiksi muokkaamalla tuottosolun toimintaa tai tuottamalla tuottosoluissa viruksen ulkopuolisia proteiineja. Adenoviruksen proteiini IX (pIX) sijaitsee viruksen kapsidissa ja sen ensisijaisena tehtävänä on stabiloida kapsidin rakennetta. On kuitenkin osoitettu, että tällä proteiinilla on muitakin rooleja adenovirusinfektiossa. Tässä tutkimuksessa oli tarkoitus selvittää nostaako pIX:n yliekspressio villityypin adenoviruksen ja kolmen eri genomin omaavan adenovirusvektorin tuottavuutta tuottosoluissa. Vektoreita tuotettiin sekä adherentti- että suspensiosoluissa, pIX:n yliekspression kanssa tai ilman. Vektorit puhdistettiin ultrasentrifugoinnilla sekä dialyysilla ja niiden tiitterit määritettiin ddPCR:n avulla. Lisäksi tutkielmassa pyrittiin havaitsemaan pIX:n sijoittumista tuottosoluissa leimaamalla pIX:llä transfektoituja soluja. pIX:n yliekspression ei havaittu nostavan virusvektoreiden tuottavuutta adherenttisoluissa, kun taas suspensiosolujen kohdalla tuottavuus nousi osalla. Suspensiossa onnistuttiin myös tuottamaan ei-pIX:ä sisältävää adenovirusvektoria samalla tehokkuudella kuin pIX:ä sisältävää virusvektoria. Tämä oli iso saavutus, sillä suspensiotuottoihin siirtyminen mahdollistaisi tulevaisuudessa kyseisen vektorin tuoton skaalauksen kaupallisiin suuren mittakaavan tuottoihin. Virusvektoreiden valmistusprosessien optimoinnilla voidaan merkittävästi vähentää tuotannon kustannuksia ja näin ollen eri virusvektorien tuottavuuden biologian tutkiminen on tärkeää nyt ja tulevaisuudessa.fi
dc.description.abstractIn gene therapy the disease is treated by gene delivery often by transporting a transgene into cells with a vector. The most used vectors are viruses that have the natural ability to transfer their genes into cells. In the production of viral vectors, the features of the final product can be affected by manipulating the genome but also by modifying the function of the producer cell or by producing proteins in the producer cells. The adenovirus protein IX (pIX) is located in the virus capsid and its primary function is to stabilize the capsid. However, studies have also suggested that this minor protein embraces other roles in the adenovirus life cycle. In this study the aim was to find out whether overexpression of pIX increases the production of one wild type adenovirus and three different adenoviral vectors. These vectors were produced in adherent and suspension cells, with and without the overexpression of pIX. The viral vectors were purified by ultracentrifugation and dialysis and their titers were determined by ddPCR. In addition, the localization of pIX in the producer cells was examined by staining the pIXtransfected cells. The results showed that the overexpression of pIX didn’t increase the productivity of viral vectors in adherent cells, whereas in suspension cells the productivity increased with some vectors. Also, non-pIX-containing adenoviral vector was produced in suspension at the same efficiency as a pIX-containing vector. This was a big achievement because the transition to suspension manufacturing would enable to scale up the production of this viral vector and meet the large demand that commercialization requires. Optimizing viral vector manufacturing processes can significantly reduce production costs and therefore studying the productivity biology of different viral vectors is important now and in the future.en
dc.format.extent72
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.language.isofi
dc.titleProteiini IX:n yliekspression vaikutus adenovirusvektoreiden tuottoon
dc.identifier.urnURN:NBN:fi:jyu-202003102352
dc.type.ontasotPro gradu -tutkielmafi
dc.type.ontasotMaster’s thesisen
dc.contributor.tiedekuntaMatemaattis-luonnontieteellinen tiedekuntafi
dc.contributor.tiedekuntaFaculty of Sciencesen
dc.contributor.laitosBio- ja ympäristötieteiden laitosfi
dc.contributor.laitosDepartment of Biological and Environmental Scienceen
dc.contributor.yliopistoJyväskylän yliopistofi
dc.contributor.yliopistoUniversity of Jyväskyläen
dc.contributor.oppiaineSolu- ja molekyylibiologiafi
dc.contributor.oppiaineCell and molecular biologyen
dc.rights.copyrightJulkaisu on tekijänoikeussäännösten alainen. Teosta voi lukea ja tulostaa henkilökohtaista käyttöä varten. Käyttö kaupallisiin tarkoituksiin on kielletty.fi
dc.rights.copyrightThis publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.en
dc.type.publicationmasterThesis
dc.contributor.oppiainekoodi4013
dc.subject.ysovirukset
dc.subject.ysoadenovirukset
dc.subject.ysogeeniterapia
dc.subject.ysoproteiinit
dc.format.contentfulltext
dc.rights.accessrightsTekijä ei ole antanut lupaa avoimeen julkaisuun, joten aineisto on luettavissa vain Jyväskylän yliopiston kirjaston arkistotyösemalta. Ks. https://kirjasto.jyu.fi/fi/tyoskentelytilat/laitteet-ja-tilat..fi
dc.rights.accessrightsThe author has not given permission to make the work publicly available electronically. Therefore the material can be read only at the archival workstation at Jyväskylä University Library (https://kirjasto.jyu.fi/en/workspaces/facilities).en
dc.type.okmG2


Aineistoon kuuluvat tiedostot

Thumbnail

Aineisto kuuluu seuraaviin kokoelmiin

Näytä suppeat kuvailutiedot