Proteiini IX:n yliekspression vaikutus adenovirusvektoreiden stabiilisuuteen ja infektiivisyyteen

Geeniterapiassa sairautta hoidetaan siirtämällä soluihin siirtogeeni, joka koodaa haluttua proteiinituotetta. Virukset toimivat hyvinä geenien kuljettimina eli vektoreina, sillä niille on luontaista siirtää perimänsä kohdesolun replikoitavaksi. Adenovirus on hyvin yleisesti käytetty geeniterapiavektori, sillä sen ominaisuudet tunnetaan hyvin ja se pystyy infektoimaan monenlaisia soluja eri solusyklin vaiheissa. Adenoviruksen rakenneproteiini IX (pIX) sijaitsee heksoniproteiinien välissä stabiloiden kapsidin rakennetta. Tutkimukset ovat kuitenkin osoittaneet, että pIX:llä on mahdollisesti myös muunlaisia rooleja adenovirusinfektion aikana. Tässä tutkimuksessa oli tarkoitus selvittää, miten kahden genomiltaan erilaisen adenovirusvektorin stabiilisuudet ja infektiivisyydet eroavat toisistaan. Sen lisäksi selvitettiin, voidaanko proteiini IX:n määrää lisätä adenoviruksen kapsidissa yliekspressoimalla sitä tuottosoluissa ja vaikuttaako määrä adenoviruksen kestävyyteen. Molempia vektoreita tuotettiin sekä pIX:n yliekpression kanssa että ilman. Proteiini IX:n lisäämisen vaikutusta adenoviruksen kapsidin kestävyyteen tutkittiin käsittelemällä tuotettuja viruksia eri tavoin ja havainnoimalla erot infektiivisyydessä. Tuotetut virukset puhdistettiin ultrasentrifugoimalla ja dialyysilla. Puhtautta ja pIX:n määrää arvioitiin Coomassie-värjäyksen sekä western blottingin avulla. Lisäksi virusten tiitterit määritettiin ddPCR:n (digital droplet polymerase chain reaction) avulla. Tuotettujen virusten infektiivisyys määritettiin infektoimalla tuottosoluja 2 tunnin ajan ja värjäämällä solut 48 tunnin kuluttua anti-pIX-vasta-aineella. Tulokset luettiin virtaussytometrilla. Eri vektorien stabiilisuuksissa ei nähty tilastollisesti merkittäviä eroja yhdessäkään käsittelykokeessa. Työssä kuitenkin havaittiin, että vektorit, jotka oli tuotettu pIX:n yliekpression kanssa olivat infektiivisempiä kuin ne, jotka oli tuotettu normaalisti tuottosoluissa. Tuloksia voidaan käyttää hyväksi suunniteltaessa tehokkaampia ja kestävämpiä geeniterapiavektoreita lääketeollisuuden käyttöön.